Ovule de souris débarrassée de son cumulus. La zone pellucide bloque l’arrivée directe du spermatozoïde sur la membrane plasmique de l’ovocyte II. Cette deuxième barrière est composée essentiellement de glycoprotéines de type ZP1, ZP2, ZP3 chez les mammifères, auxquelles s’ajoute la ZP4 chez l’être humain. L’interaction ligand/récepteur nécessaire au passage du spermatozoïde est spécifique à chaque espèce. C’est d’ailleurs cette barrière qui assure le blocage des fécondations inter-espèces comme par exemple le croisement humain/murin. Sa solidification après fécondation de l’ovule, empêche la polyspermie. L’espace entre la zone pellucide et la membrane plasmique de l’ovule s’appelle l’espace périvitellin.